英文名稱：N-MID Osteocalcin ELISA
【預(yù)期用途】
用于人血清及血漿中骨鈣素的定量檢測。氨基端和中段骨鈣素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒用酶聯(lián)免疫法定量測定人血清和血漿中作為成骨細胞活性指標的骨鈣素含量，該項分析可用于骨質(zhì)疏松 的預(yù)防。
骨鈣素值的變化可取決于人的年齡(絕經(jīng)年數(shù))，生物節(jié)律，腎小球的濾清速率和藥物治療持續(xù)時間。
本檢測結(jié)果應(yīng)該與對患者的臨床評估和其它診斷檢測所獲得的資料結(jié)合使用。因此，不推薦將骨鈣素值用于總?cè)丝谥械墓琴|(zhì)疏松篩選檢測。此外，不應(yīng)僅根據(jù)骨鈣素值改變藥 物劑量或停止用藥。當評估后續(xù)樣本時，應(yīng)在一天中同一時間采集同類型樣本，血清或抗凝血漿作為基線。
【生理學】
骨鈣素，或骨γ-羧基谷氨酸蛋白(BGP)，是骨基質(zhì)中主要的非膠原蛋白質(zhì)。其分子量大約5800道爾頓，含有49個氨基酸，包括三個γ-羧基谷氨酸殘基。
骨鈣素由成骨細胞在骨中合成。合成后部分進入骨基質(zhì)中，部分流入循環(huán)系統(tǒng)。骨鈣素的明確生理作用仍不清楚。大量研究顯示，骨鈣素在循環(huán)系統(tǒng)中的水平可反映骨形成速率(1一14)。
已證明血清中骨鈣素的測定有助于鑒別婦女發(fā)展為骨質(zhì)疏松的危險，有助于監(jiān)測絕經(jīng)前和絕經(jīng)后，以及抗骨吸收治療中骨的代謝。
氨基端和中段骨鈣素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒是基于運用兩種高度特異的抗人骨鈣素單克隆抗體（Mabs）。識別骨鈣素中部(氨基酸20一29)的生物素標記抗體用于抗原抗體復合物的捕獲，識別氨基端(氨基酸10一16)的過氧化物酶偶聯(lián)抗體用于檢測。除完整骨鈣素(氨基酸1一49)之外，氨基端-中部片段(氨基酸1一43)也 同時被檢測。
標準品、質(zhì)控品和待測樣本加入鏈霉抗生物素蛋白(streptavidin)包被的微孔板中，然后加入生物素標記抗體和過氧化物酶偶聯(lián)抗體的混合物。室溫孵育2小時后清洗微孔板，加入生色底物，加入硫酸終止顯色反應(yīng)。最后測量吸光度。
【臨床應(yīng)用】
絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松：
監(jiān)測抗骨吸收治療的（如激素替代療法（HRT)，雙膦酸鹽療法）。
評估病人骨形成：
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【主要組成成份】
1.鏈霉抗生物素蛋白(Streptavidin) 包被的微孔板 (MTP)
鏈霉抗生物素蛋白預(yù)包被的條形微孔板 (12 條 x 8孔)，置于一塑料框架中。
2.骨鈣素標準A (瓶A)
一瓶含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和防腐劑的PBS緩沖的冷凍干燥品。將標準A溶于 5.0 毫 升蒸餾水中。標準A用后必須存放于–18 °C以下。
3.骨鈣素標準B一F (瓶B一瓶F)
五瓶含有合成人骨鈣素、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和防腐劑的PBS緩沖的冷凍干燥品。將各標準樣本溶于0.5mL蒸餾水中。準確濃度標在各瓶上。 標準樣本用后必須
存 放于–18°C以下，且只能凍融兩次。
4.質(zhì)控(瓶CO1—2)
兩瓶含有合成人骨鈣素、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和防腐劑的PBS緩沖的冷凍干燥品。將質(zhì)控樣本溶于0.5mL蒸餾水中。質(zhì)控品用后必須存放于–18°C以下，且只能凍融兩次。請參考所附數(shù)據(jù)表中質(zhì)控品的濃度范圍。
5.過氧化物酶偶聯(lián)抗體 (1號瓶)
一瓶(0.25mL)過氧化物酶偶聯(lián)的鼠抗骨鈣素氨基端特異性單克隆抗體濃縮液(溶于含蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，去污劑和防腐劑的TRIS緩沖液中)。使用前加入10mL偶聯(lián)稀釋液(3號瓶)。
6.生物素標記抗體 (2號瓶)
一瓶(0.25mL)生物素標記的鼠抗骨鈣素中部的特異性單克隆抗體濃縮液(溶于含蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，去污劑和防腐劑的TRIS緩沖液中)。使用前加入10mL偶聯(lián)稀釋液(3號瓶)。
7.偶聯(lián)稀釋液 (3號瓶)
一瓶( 至少22 mL)含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，去污劑和防腐劑的PBS緩沖溶液。
8.底物溶液 (瓶TMB)
一瓶( 至少12 mL)可直接使用的四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物(溶于酸性緩沖溶液)。
請注意該生色底物可帶淺藍色。
9.終止液 (瓶ST)
一瓶( 至少12 mL)可直接使用的0.18mol/L硫酸溶液。
10.清洗溶液 (瓶W)
一瓶(至少20mL)含有去污劑和防腐劑的濃縮清洗緩沖液，用前以1體積濃縮清洗緩沖溶液+50體積蒸餾水的比例稀釋。
11.封口膜
孵育時密封微孔板的粘性薄膜。
【儲存條件及有效期】
收到氨基端和中段骨鈣素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒后應(yīng)在 2一8°C保存。試劑在此條件下穩(wěn)定至包裝盒上所標有效日期。
重新溶解后標準品和質(zhì)控品應(yīng)在–18°C以下存放，最長存放3 個月，且只能凍融兩次。當抗體試劑混合后，剩余混合物應(yīng)存放在2一8°C，存放應(yīng)不超過1個月，或在–18°C 以下凍結(jié)。其它剩余試劑以及微孔板應(yīng)在2一8°C保存。
【適用儀器】
適用于具有450nm、650nm波長的所有全自動、半自動酶標儀。
【樣本要求】
靜脈取血樣，避免溶血。采樣后 3 小時內(nèi)分離血清。建議立即冷凍樣本 (<–18°C )當分析血漿樣本時，可使用肝素或EDTA抗凝的血漿。
【試劑盒特點】
易于操作
N-MID夾心酶聯(lián)免疫分析試劑盒可識別完整的骨鈣素和大的N-MID骨鈣素片段。
在檢測完整骨鈣素方面，N-MID試劑盒比其他只能檢測完整骨鈣素的試劑盒具有更高的穩(wěn)定性和可重現(xiàn)性。
高效的檢測模式。