英文名稱：N-MID Osteocalcin ELISA
【預(yù)期用途】
本產(chǎn)品僅供科研使用。
用于人血清及血漿中骨鈣素的定量檢測(cè)。氨基端和中段骨鈣素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒用酶聯(lián)免疫法定量測(cè)定人血清和血漿中作為成骨細(xì)胞活性指標(biāo)的骨鈣素含量，該項(xiàng)分析可用于骨質(zhì)疏松的預(yù)防。
骨鈣素值的變化可取決于人的年齡(絕經(jīng)年數(shù))，生物節(jié)律，腎小球的濾清速率和藥物治療持續(xù)時(shí)間。本檢測(cè)結(jié)果應(yīng)該與對(duì)患者的臨床評(píng)估和其它診斷檢測(cè)所獲得的資料結(jié)合使用。因此，不推薦將骨鈣素值用于總?cè)丝谥械墓琴|(zhì)疏松篩選檢測(cè)。此外，不應(yīng)僅根據(jù)骨鈣素值改變藥 物劑量或停止用藥。當(dāng)評(píng)估后續(xù)樣本時(shí)，應(yīng)在一天中同一時(shí)間采集同類型樣本，血清或抗凝血漿作為基線。
【生理學(xué)】
骨鈣素，或骨γ-羧基谷氨酸蛋白(BGP)，是骨基質(zhì)中主要的非膠原蛋白質(zhì)。其分子量大約5800道爾頓，含有49個(gè)氨基酸，包括三個(gè)γ-羧基谷氨酸殘基。
骨鈣素由成骨細(xì)胞在骨中合成。合成后部分進(jìn)入骨基質(zhì)中，部分流入循環(huán)系統(tǒng)。骨鈣素的明確生理作用仍不清楚。大量研究顯示，骨鈣素在循環(huán)系統(tǒng)中的水平可反映骨形成速率(1一14)。
已證明血清中骨鈣素的測(cè)定有助于鑒別婦女發(fā)展為骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)，有助于監(jiān)測(cè)絕經(jīng)前和絕經(jīng)后，以及抗骨吸收治療中骨的代謝。
氨基端和中段骨鈣素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒是基于運(yùn)用兩種高度特異的抗人骨鈣素單克隆抗體（Mabs）。識(shí)別骨鈣素中部(氨基酸20一29)的生物素標(biāo)記抗體用于抗原抗體復(fù)合物的捕獲，識(shí)別氨基端(氨基酸10一16)的過(guò)氧化物酶偶聯(lián)抗體用于檢測(cè)。除完整骨鈣素(氨基酸1一49)之外，氨基端-中部片段(氨基酸1一43)也 同時(shí)被檢測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣本加入鏈霉抗生物素蛋白(streptavidin)包被的微孔板中，然后加入生物素標(biāo)記抗體和過(guò)氧化物酶偶聯(lián)抗體的混合物。室溫孵育2小時(shí)后清洗微孔板，加入生色底物，加入硫酸終止顯色反應(yīng)。最后測(cè)量吸光度。
【臨床應(yīng)用】
絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松：
監(jiān)測(cè)抗骨吸收治療的（如激素替代療法（HRT)，雙膦酸鹽療法）。
評(píng)估病人骨形成：
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【主要組成成份】
1.鏈霉抗生物素蛋白(Streptavidin) 包被的微孔板 (MTP)
鏈霉抗生物素蛋白預(yù)包被的條形微孔板 (12 條 x 8孔)，置于一塑料框架中。
2.骨鈣素標(biāo)準(zhǔn)A (瓶A)
一瓶含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和防腐劑的PBS緩沖的冷凍干燥品。將標(biāo)準(zhǔn)A溶于 5.0 毫 升蒸餾水中。標(biāo)準(zhǔn)A用后必須存放于–18 °C以下。
3.骨鈣素標(biāo)準(zhǔn)B一F (瓶B一瓶F)
五瓶含有合成人骨鈣素、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和防腐劑的PBS緩沖的冷凍干燥品。將各標(biāo)準(zhǔn)樣本溶于0.5mL蒸餾水中。準(zhǔn)確濃度標(biāo)在各瓶上。 標(biāo)準(zhǔn)樣本用后必須
存 放于–18°C以下，且只能凍融兩次。
4.質(zhì)控(瓶CO1—2)
兩瓶含有合成人骨鈣素、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和防腐劑的PBS緩沖的冷凍干燥品。將質(zhì)控樣本溶于0.5mL蒸餾水中。質(zhì)控品用后必須存放于–18°C以下，且只能凍融兩次。請(qǐng)參考所附數(shù)據(jù)表中質(zhì)控品的濃度范圍。
5.過(guò)氧化物酶偶聯(lián)抗體 (1號(hào)瓶)
一瓶(0.25mL)過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的鼠抗骨鈣素氨基端特異性單克隆抗體濃縮液(溶于含蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，去污劑和防腐劑的TRIS緩沖液中)。使用前加入10mL偶聯(lián)稀釋液(3號(hào)瓶)。
6.生物素標(biāo)記抗體 (2號(hào)瓶)
一瓶(0.25mL)生物素標(biāo)記的鼠抗骨鈣素中部的特異性單克隆抗體濃縮液(溶于含蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，去污劑和防腐劑的TRIS緩沖液中)。使用前加入10mL偶聯(lián)稀釋液(3號(hào)瓶)。
7.偶聯(lián)稀釋液 (3號(hào)瓶)
一瓶( 至少22 mL)含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，去污劑和防腐劑的PBS緩沖溶液。
8.底物溶液 (瓶TMB)
一瓶( 至少12 mL)可直接使用的四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物(溶于酸性緩沖溶液)。
請(qǐng)注意該生色底物可帶淺藍(lán)色。
9.終止液 (瓶ST)
一瓶( 至少12 mL)可直接使用的0.18mol/L硫酸溶液。
10.清洗溶液 (瓶W)
一瓶(至少20mL)含有去污劑和防腐劑的濃縮清洗緩沖液，用前以1體積濃縮清洗緩沖溶液+50體積蒸餾水的比例稀釋。
11.封口膜
孵育時(shí)密封微孔板的粘性薄膜。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
收到氨基端和中段骨鈣素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒后應(yīng)在 2一8°C保存。試劑在此條件下穩(wěn)定至包裝盒上所標(biāo)有效日期。
重新溶解后標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品應(yīng)在–18°C以下存放，最長(zhǎng)存放3 個(gè)月，且只能凍融兩次。當(dāng)抗體試劑混合后，剩余混合物應(yīng)存放在2一8°C，存放應(yīng)不超過(guò)1個(gè)月，或在–18°C 以下凍結(jié)。其它剩余試劑以及微孔板應(yīng)在2一8°C保存。
【適用儀器】
適用于具有450nm、650nm波長(zhǎng)的所有全自動(dòng)、半自動(dòng)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
靜脈取血樣，避免溶血。采樣后 3 小時(shí)內(nèi)分離血清。建議立即冷凍樣本 (<–18°C )當(dāng)分析血漿樣本時(shí)，可使用肝素或EDTA抗凝的血漿。
【試劑盒特點(diǎn)】
易于操作
N-MID夾心酶聯(lián)免疫分析試劑盒可識(shí)別完整的骨鈣素和大的N-MID骨鈣素片段。
在檢測(cè)完整骨鈣素方面，N-MID試劑盒比其他只能檢測(cè)完整骨鈣素的試劑盒具有更高的穩(wěn)定性和可重現(xiàn)性。
高效的檢測(cè)模式。