艾狄斯®25羥基維生素DS檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱(chēng)： 25-Hydroxy Vitamin
DS EIA
【預(yù)期用途】
本產(chǎn)品僅供科研使用。
25羥基維生素DS檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）是一種酶聯(lián)免疫測(cè)定，用于定量測(cè)定人血清或血漿中的25羥基維生素D及其他羥基化代謝物。結(jié)果應(yīng)與其他臨床和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)相結(jié)合，以輔助臨床醫(yī)師對(duì)維生素D缺乏的評(píng)估。
【概要說(shuō)明】
1. 維生素D是一個(gè)常用于與脂溶性類(lèi)固醇衍生物（secosteroids）緊密相關(guān)的家族的總稱(chēng)。在陽(yáng)光照射下，位于表皮中生長(zhǎng)活躍層深處的7-脫氫膽固醇經(jīng)“B”鏈的光裂解生成維生素D3前體，即維生素D3異構(gòu)體。維生素D3和維生素D2也可通過(guò)飲食補(bǔ)充獲得且來(lái)自于有限的食物數(shù)量。維生素D2與維生素D3的代謝方式類(lèi)似1。維生素D存在于脂肪組織當(dāng)中，與維生素D結(jié)合蛋白（VDBP）和白蛋白結(jié)合進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)2。
2. 在肝臟中，維生素D羥化為25羥基維生素D，仍與VDBP結(jié)合進(jìn)行循環(huán)。一小部分25(OH)D 在甲狀旁腺激素和核鈣離子水平的直接調(diào)節(jié)下在腎臟中進(jìn)一步羥化，形成有生物活性的鈣調(diào)節(jié)素1,25雙羥基維生素D。維生素D進(jìn)一步羥化和代謝產(chǎn)生水溶性和易分泌的復(fù)合物。肝臟維生素D25羥化酶活性未能緊密調(diào)節(jié)，且皮膚中維生素D3的改變或維生素D（D3或D2）的攝取將取決于25(OH)D循環(huán)水平的改變3。
3. 血清25羥基維生素D濃度被認(rèn)為是測(cè)定全面維生素D狀態(tài)的最可靠的指標(biāo)，因而可用于測(cè)定患者是否出現(xiàn)維生素D缺乏4。
【檢驗(yàn)原理】
25羥基維生素DS檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）是一種酶聯(lián)免疫測(cè)定，用于定量測(cè)定人體血清或血漿中的25羥基維生素D及其他羥基化的代謝產(chǎn)物。校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本被標(biāo)記有25羥基維生素D的生物素稀釋。稀釋后的樣本在包被了高特異性羊25(OH)D抗體的微孔中室溫孵育后沖洗。加入酶（辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)記的抗生物素蛋白并有選擇的與復(fù)合生物素結(jié)合，接著沖洗，再利用底物（TMB）顯色。終止反應(yīng)后采用酶標(biāo)儀讀取吸光度，顏色強(qiáng)度與25(OH)D濃度成反比。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑盒自生產(chǎn)之日起在2-8℃下可保存12個(gè)月。
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試劑組份 |
開(kāi)封后有效期 |
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生物素 25(OH)D溶液 |
8周 復(fù)溶后2-8℃下避光保存 |
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未用完的微孔板 |
8周 應(yīng)立即放回附有干燥劑的鋁箔袋中，封好鋁泊袋，置于2-8℃下保存 |
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校準(zhǔn)品/質(zhì)控品 |
8周 啟用后置于2-8℃下保存 |
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洗液 |
8周 配制后室溫（18-25℃）保存 |
試劑可能變壞的跡象：
l 任何一個(gè)試劑組份中有反常微粒子出現(xiàn)。
l 校準(zhǔn)品0吸光率下降。
l 曲線(xiàn)范圍偏離正常位置。
【樣本要求】
采用血清或血漿
(EDTA 或肝素鈉或肝素鋰或枸櫞酸鈉) 樣本。整個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)使用相同的樣本類(lèi)型。
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樣本儲(chǔ)存穩(wěn)定性 |
周期 |
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室溫下 |
72小時(shí) |
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2-8℃ |
72小時(shí) |
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凍融次數(shù) |
3次 |
注意事項(xiàng)：
1） 樣本采集后應(yīng)盡快分離。長(zhǎng)期儲(chǔ)存應(yīng)置于‐20℃或以下。避免樣本反復(fù)凍融。
2） 在檢測(cè)前，樣本含有特殊物質(zhì)應(yīng)先離心。
3） 請(qǐng)勿使用熱失活樣本。
4） 某些樣本采集管在特定情況下可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。
5） 推薦完全遵從試管生產(chǎn)廠家的要求采集樣本，特別是在采用初生管時(shí)。
6） 樣本的儲(chǔ)存和穩(wěn)定性要求是各種實(shí)驗(yàn)室的通用建議。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)和指引來(lái)建立其自身的樣本處理和儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
代表性的性能指標(biāo)顯示如下，不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果可能會(huì)有所不同。
檢測(cè)范圍
25羥基維生素DS檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）檢測(cè)范圍為0-260 nmol/L（0-104 ng/mL）
測(cè)量范圍（報(bào)告范圍）：
25羥基維生素DS檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）報(bào)告范圍為12-260 nmol/L（4.8-104 ng/mL）。檢測(cè)結(jié)果低于12 nmol/L（4.8 ng/mL）時(shí)應(yīng)報(bào)告為＜12 nmol/L或＜4.8 ng/mL。
靈敏度
空白檢測(cè)限（LoB）和定量檢測(cè)限（LoQ）根據(jù)CLSI EP7-A來(lái)確定，通過(guò)檢測(cè)60個(gè)空白和118個(gè)低水平樣本獲得。
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靈敏度 |
25（OH）D水平 |
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LoB |
3.4 nmol/L（1.4 ng/mL） |
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LoQ |
11.9 nmol/L（4.8 ng/mL） |
精密度
精密度是根據(jù)CLSI EP-5A2《定量檢測(cè)方法之效價(jià)精密度評(píng)估》進(jìn)行評(píng)估。10份血清樣本采用3個(gè)批次的試劑在20天內(nèi)每天2次雙孔檢測(cè)（每個(gè)樣本檢測(cè)次數(shù)n=80次）。
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樣本 |
平均值（nmol/L） |
批內(nèi) |
總量 |
||
|
SD |
CV% |
SD |
CV% |
||
|
1 |
29.9 |
1.3 |
4.3% |
3 |
10.0% |
|
2 |
48.7 |
1.4 |
2.9% |
2.2 |
4.5% |
|
3 |
56 |
1.3 |
2.3% |
3.2 |
5.7% |
|
4 |
62.9 |
1.6 |
2.5% |
4.2 |
6.7% |
|
5 |
71.9 |
2 |
2.8% |
5.2 |
7.2% |
|
6 |
104.7 |
2.9 |
2.8% |
6 |
5.7% |
|
7 |
113.6 |
2.6 |
2.3% |
6.3 |
5.5% |
|
8 |
132.9 |
5.5 |
4.1% |
9.9 |
7.4% |
|
9 |
168.2 |
6.5 |
3.9% |
12.3 |
7.3% |
|
10 |
194.8 |
6.7 |
3.4% |
14.9 |
7.6% |
|
樣本 |
平均值（ng/mL） |
批內(nèi) |
總量 |
||
|
SD |
CV% |
SD |
CV% |
||
|
1 |
12.0 |
1.3 |
4.3% |
3 |
10.0% |
|
2 |
19.5 |
1.4 |
2.9% |
2.2 |
4.5% |
|
3 |
22.4 |
1.3 |
2.3% |
3.2 |
5.7% |
|
4 |
25.2 |
1.6 |
2.5% |
4.2 |
6.7% |
|
5 |
28.7 |
2 |
2.8% |
5.2 |
7.2% |
|
6 |
41.9 |
2.9 |
2.8% |
6 |
5.7% |
|
7 |
45.4 |
2.6 |
2.3% |
6.3 |
5.5% |
|
8 |
53.2 |
5.5 |
4.1% |
9.9 |
7.4% |
|
9 |
67.3 |
6.5 |
3.9% |
12.3 |
7.3% |
|
10 |
77.9 |
6.7 |
3.4% |
14.9 |
7.6% |
線(xiàn)性
線(xiàn)性是根據(jù)CLSI EP-6A《定量檢測(cè)程序中的線(xiàn)性評(píng)估：一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法》來(lái)進(jìn)行評(píng)估。雙孔檢測(cè)不同濃度的25（OH)D樣本。其結(jié)果均值和預(yù)設(shè)的濃度進(jìn)行對(duì)比。檢測(cè)前，樣本通過(guò)低濃度患者樣本稀釋高濃度患者樣本獲得。
檢測(cè)濃度與預(yù)期濃度的線(xiàn)性關(guān)系如下：
觀測(cè)濃度=0.92×（預(yù)期濃度）+3.05nmol/L
觀測(cè)濃度=0.92×（預(yù)期濃度）+1.22ng/L
回歸系數(shù)R2=0.92
溯源性
25羥基維生素DS檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）可溯源至同位素稀釋-液相色譜-質(zhì)譜法（ID-LC/MS/MS）25（OH）D參考測(cè)量程序(RMP),該程序用于分發(fā)VDSP樣本的目標(biāo)靶值。而同位素稀釋-液相色譜-質(zhì)譜法參考測(cè)量程序（ID-LC-MS/MS RMP）可溯源至美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究所的標(biāo)準(zhǔn)參考材料(SRM) 297227，28.
68份樣本在ID-LC-MS/MS RMP測(cè)得范圍為22.5至198nmol/L（9.0ng/mL到98.6ng/mL）,采用25羥基維生素DS檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）與ID-LC-MS/MS RMP對(duì)比評(píng)估其溯源性。兩者的相關(guān)性用Passing–Bablok回歸和Deming回歸來(lái)描述。
Passing–Bablok回歸：
EIA=0.97×(ID-LC-MS/MS RMP)+3.2 nmol/L
EIA=0.97×(ID-LC-MS/MS RMP)+1.3 ng/mL
斜率95% CI：0.88—1.07
截距95% CI：-3.9 — 9.3
nmol/L
-1.6—3.7
ng/mL
Deming回歸：
EIA=1.05×(ID-LC-MS/MS RMP)+3.0 nmol/L
EIA=1.05×(ID-LC-MS/MS RMP)+1.2ng/mL
斜率95% CI：0.84-1.26
截距95% CI：-17.6 —11.6
nmol/L
-7.0 — 4.6
ng/mL
Pearson相關(guān)系數(shù) r=0.96.
特異性
25（OH)D3特異性檢測(cè)的分析樣本只含有25（OH)D3。通過(guò)各種方法一共檢測(cè)55個(gè)處于較大范圍內(nèi)的25（OH)D3樣本【22.5-198nmol/L（9.0-79.2ng/mL），用ID-LC-MS/MS RMP確定】，數(shù)據(jù)處理采用Deming回歸分析，結(jié)果方程如下：
EIA=0.99×（ID-LC-MS/MS RMP）+0.6nmol/L
EIA=0.99×（ID-LC-MS/MS RMP）+0.2ng/mL
Pearson相關(guān)系數(shù)R：0.98
類(lèi)似的25（OH)D2特異性檢測(cè)樣本來(lái)源于含有25（OH)D2的患者。通過(guò)各種方法一共檢測(cè)32個(gè)處于較大范圍內(nèi)的25（OH)D2樣本【1.4-55.4nmol/L（0.6-22.2ng/mL），用ID-LC-MS/MS RMP確定】，數(shù)據(jù)處理采用Deming回歸分析，結(jié)果方程如下：
EIA=0.88×（ID-LC-MS/MS RMP）+6.3nmol/L
EIA=0.88×（ID-LC-MS/MS RMP）+2.5ng/mL
Pearson相關(guān)系數(shù)R：0.96
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分析物 |
交叉反應(yīng)（%） |
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Cholecalciferol(D3) |
0.30% |
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Ergocalciferol(D2) |
6.10% |
|
24,25-(OH)2D3 |
>100% |
|
24,25-(OH)2D2 |
>100% |
|
1,25-(OH)2D3 |
115% |
|
1,25-(OH)2D2 |
105% |
|
3-epi-25(OH)D3 |
0.10% |
|
3-epi-25(OH)D2 |
0% |
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Paricalcitol |
18% |